化學發(fā)光定氮儀的化學發(fā)光技術解析
點擊次數：2409 更新時間：2019-10-28
電化學發(fā)光是通過對電極施加一定的電壓進行電化學反應而發(fā)光，通過測量化學發(fā)光光譜和強度來測定物質含量的一種痕量分析方法。它將電分析化學手段和化學發(fā)光方法相結合，具有*的優(yōu)點，如重現(xiàn)性和靈敏度進一步提高，在多種組份同時存在時，可施加不同波形、不同電壓的信號進行選擇性測量等，是潛在的分析手段之一。
化學發(fā)光免疫分析是以標記發(fā)光劑為示蹤物信號建立起來的一種非放射標記免疫分析法，具有靈敏度高、線性范圍寬、儀器設備簡單、操作方便、分析速度快和容易實現(xiàn)自動化等優(yōu)點。魯米諾、異魯米諾及其衍生物、吖啶酯衍生物、辣根過氧化物酶和堿性磷酸酶是目前化學發(fā)光免疫分析中使用多的標記物。
微粒子化學發(fā)光是化學發(fā)光免疫分析的特殊形式，是以化學發(fā)光劑為底物的酶免疫技術，同時應用了磁性微珠做固相載體，增加了吸附面積，使抗原抗體大限度的結合。以3-(2-螺旋金剛烷)-4-甲氧基-4- (3-磷氧酰)．苯基．1，2一二氧環(huán)乙烷(AMPPD)為發(fā)光底物在堿性磷酸酶(Alkaline phosphatase，ALP)的作用下，迅速去磷酸酶，生成不穩(wěn)定的中介體AMPPD-，進而產生激發(fā)態(tài)產物，當其躍遷回到基態(tài)時產生光子。微粒子化學發(fā)光技術所需標本量極少，孵育時間大大縮減，同時因其選擇性吸附抗原，從而提高了特異性、靈敏性，使測定結果準確、可靠，并減少污染。
化學發(fā)光生物傳感器是通過非創(chuàng)傷或非損傷性的辦法，連續(xù)、實時、動態(tài)地檢測生物體內的某一種或幾種物質濃度的技術。該技術以化學發(fā)光作為換能器，不但繼承了化學發(fā)光高靈敏度的優(yōu)點，而且大大提高了化學發(fā)光的選擇性。按照所固定化的生物組分的種類，可以將化學發(fā)光生物傳感器分為酶傳感器、免疫傳感器、組織傳感器、核酸傳感器及微生物傳感器等。特別是化學發(fā)光免疫傳感器是將具有分子識別作用的抗原或抗體以適當的方式固定化而制成，它結合了化學發(fā)光高靈敏度和抗原抗體特異性結合的高度專一性以及無污染等特點，是替代放射免疫分析的重要分析工具，已日益受到重視。
化學發(fā)光核酸探針已用于檢查病毒、細菌和原蟲的DNA。以魯米諾增強化學發(fā)光檢測體系的核酸探針主要有兩種形式，一種是用生物素標記探針，雜交后經過分離，再以過氧化物酶標記的親和素與生物素結合，加入魯米諾和增強劑后測發(fā)光。另一種是以過氧化物酶直接標記探針，用增強的魯米諾檢測發(fā)光。核酸探針亦可用吖啶酯或AP來標記，吖啶類發(fā)光體系發(fā)出的是瞬時光，而AP以AMPPD作為發(fā)光底物，其發(fā)光體系具有發(fā)光持續(xù)穩(wěn)定的特點，發(fā)光時間可長達幾天，既可用發(fā)光儀也能用簡單的感光膠片檢測。另外，AP-AMPPD發(fā)光體系具有非常高的靈敏度，無論是固相還是液相檢測，對標記物堿性磷酸酶的檢測限可達10-21(<1000 AP分子)，是目前靈敏的核酸測定方法之一，已用于檢測B19微小病毒DNA、人乳頭瘤病毒DNA(HPV)．巨細胞病毒DNA(CMV)，并在DNA測序中有很好的應用。
化學發(fā)光免疫分析是以標記發(fā)光劑為示蹤物信號建立起來的一種非放射標記免疫分析法，具有靈敏度高、線性范圍寬、儀器設備簡單、操作方便、分析速度快和容易實現(xiàn)自動化等優(yōu)點。魯米諾、異魯米諾及其衍生物、吖啶酯衍生物、辣根過氧化物酶和堿性磷酸酶是目前化學發(fā)光免疫分析中使用多的標記物。
微粒子化學發(fā)光是化學發(fā)光免疫分析的特殊形式，是以化學發(fā)光劑為底物的酶免疫技術，同時應用了磁性微珠做固相載體，增加了吸附面積，使抗原抗體大限度的結合。以3-(2-螺旋金剛烷)-4-甲氧基-4- (3-磷氧酰)．苯基．1，2一二氧環(huán)乙烷(AMPPD)為發(fā)光底物在堿性磷酸酶(Alkaline phosphatase，ALP)的作用下，迅速去磷酸酶，生成不穩(wěn)定的中介體AMPPD-，進而產生激發(fā)態(tài)產物，當其躍遷回到基態(tài)時產生光子。微粒子化學發(fā)光技術所需標本量極少，孵育時間大大縮減，同時因其選擇性吸附抗原，從而提高了特異性、靈敏性，使測定結果準確、可靠，并減少污染。
化學發(fā)光生物傳感器是通過非創(chuàng)傷或非損傷性的辦法，連續(xù)、實時、動態(tài)地檢測生物體內的某一種或幾種物質濃度的技術。該技術以化學發(fā)光作為換能器，不但繼承了化學發(fā)光高靈敏度的優(yōu)點，而且大大提高了化學發(fā)光的選擇性。按照所固定化的生物組分的種類，可以將化學發(fā)光生物傳感器分為酶傳感器、免疫傳感器、組織傳感器、核酸傳感器及微生物傳感器等。特別是化學發(fā)光免疫傳感器是將具有分子識別作用的抗原或抗體以適當的方式固定化而制成，它結合了化學發(fā)光高靈敏度和抗原抗體特異性結合的高度專一性以及無污染等特點，是替代放射免疫分析的重要分析工具，已日益受到重視。
化學發(fā)光核酸探針已用于檢查病毒、細菌和原蟲的DNA。以魯米諾增強化學發(fā)光檢測體系的核酸探針主要有兩種形式，一種是用生物素標記探針，雜交后經過分離，再以過氧化物酶標記的親和素與生物素結合，加入魯米諾和增強劑后測發(fā)光。另一種是以過氧化物酶直接標記探針，用增強的魯米諾檢測發(fā)光。核酸探針亦可用吖啶酯或AP來標記，吖啶類發(fā)光體系發(fā)出的是瞬時光，而AP以AMPPD作為發(fā)光底物，其發(fā)光體系具有發(fā)光持續(xù)穩(wěn)定的特點，發(fā)光時間可長達幾天，既可用發(fā)光儀也能用簡單的感光膠片檢測。另外，AP-AMPPD發(fā)光體系具有非常高的靈敏度，無論是固相還是液相檢測，對標記物堿性磷酸酶的檢測限可達10-21(<1000 AP分子)，是目前靈敏的核酸測定方法之一，已用于檢測B19微小病毒DNA、人乳頭瘤病毒DNA(HPV)．巨細胞病毒DNA(CMV)，并在DNA測序中有很好的應用。